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        組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP) 活性測定試劑盒說明書

        發布時間:2022-12-12 點擊次數:130

        規格:50管/24樣

        注意:正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

        測定意義:

        AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

        測定原理:

        在堿性環境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安替比林和鐵氰化反應紅色亞醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過測定 510 nm 吸光度增加速率,來計算AKP 活性。

        自備儀器和用品:

        可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

        試劑組成和配制:

        試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。

        試劑二:液體×1 瓶,4℃避光保存。

        試劑三:液體×1 瓶,4℃避光保存。

        試劑四:液體×1 瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。

        標準品:液體×1 支(EP 管中),2 μ mol/mL 酚標準液,4℃保存。

        粗酶液提?。?/span>

        1. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,

        加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿,4℃、8000g 離心 10min,取上清液待測。

        2. 血液可直接測定,或者適當稀釋后測定。

        測定步驟:

        1. 分光光度計預熱30min,調節波長到510nm,蒸餾水調零。

        2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30min。

        3. 空白管:取EP管,加入20μL蒸餾水,200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。

        4. 標準管:取EP管,加入20μL標準品,200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510 nm 測定吸光度,記為A標準管。

        5. 對照管:取EP管,加入200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻;最后加入20μL上清液,混勻后于510 nm測定吸光度,記為A對照管。

        6. 測定管:取EP管,加入20μL上清液,200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于 37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510 nm 測定吸光度,記為A測定管。

        注意:空白管和標準管只需測定一次。

        規格:50管/24樣

        注意:正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

        測定意義:

        AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

        測定原理:

        在堿性環境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安替比林和鐵氰化反應紅色亞醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過測定 510 nm 吸光度增加速率,來計算AKP 活性。

        自備儀器和用品:

        可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

        試劑組成和配制:

        試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。

        試劑二:液體×1 瓶,4℃避光保存。

        試劑三:液體×1 瓶,4℃避光保存。

        試劑四:液體×1 瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。

        標準品:液體×1 支(EP 管中),2 μ mol/mL 酚標準液,4℃保存。

        粗酶液提?。?/span>

        1. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,

        加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿,4℃、8000g 離心 10min,取上清液待測。

        2. 血液可直接測定,或者適當稀釋后測定。

        測定步驟:

        1. 分光光度計預熱30min,調節波長到510nm,蒸餾水調零。

        2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30min。

        3. 空白管:取EP管,加入20μL蒸餾水,200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。

        4. 標準管:取EP管,加入20μL標準品,200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510 nm 測定吸光度,記為A標準管。

        5. 對照管:取EP管,加入200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻;最后加入20μL上清液,混勻后于510 nm測定吸光度,記為A對照管。

        6. 測定管:取EP管,加入20μL上清液,200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于 37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510 nm 測定吸光度,記為A測定管。

        注意:空白管和標準管只需測定一次。


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